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基于精准突变库的亲和力改造
超过110个项目经验
当抗体药物的亲和力不能满足其后期开发需求时可以通过体外亲和力成熟实验进行优化，从而获得更佳的功能和药效。一个成功的亲和力成熟项目需要获得较多的亲和力提升佳，且CDR区突变尽可能少的突变体，这需要通过构建高质量的突变文库以及强大的筛选平台获得。目前主要的技术路线是构建NNK突变文库后通过噬菌体展示技术筛选突变体，但这种方法不可避免的产生冗余突变和终止密码子，产生截断产物，氨基酸比例分布均一性差，在后期筛选中极大概率丢失高质量突变体。
不同于传统方法，金斯瑞蓬勃生物使用基于Trimer引物的突变文库和基于半导体精准引物池合成的突变文库，两种文库均可精准控制氨基酸分布。同时结合噬菌体展示或FASEBA高通量筛选平台技术，可以充分提高项目成功率，满足您对亲和力的各种需求。
丰富的项目经验
110+项目经验
93%项目成功率
高质量精准突变文库
Trimer突变文库
基于半导体引物池的精准突变文库
均可精准控制氨基酸分布比例
亲和力保证
标准型服务保证5倍提升
深度型服务保证10倍提升
金斯瑞蓬勃生物可提供标准型和深度型两种亲和力成熟服务套餐，满足您不同的亲和力成熟需求。
标准型服务方案通过构建Trimer组合突变文并用噬菌体展示技术筛选，可在12-14周交付满意的纯化抗体，保证亲和力提升5倍。
在抗体研发中往往通过突变CDR区来提高抗体和抗原的亲和力，基于抗原抗体复合物或抗体结构，通过计算机模拟的方法指导抗体优化，从而提升抗体抗原的亲和力。
MOE软件通过直接链接RCSB/PDB数据库，并且包括十几个经典蛋白家族结构数据库（如转运蛋白家族，GPCR家族蛋白激酶等），从而高效的进行抗体的结构模拟。
Trimer引物是3个核苷按预定种类和顺序连接起来所形成的三联核苷（Trimer phosphoramidites），每个trimer对应特定的氨基酸。由Trimer引物构建的突变文库可避免密码子偏移、移码突变和控制终止密码子的掺入等问题，突变文库的覆盖度高，均一性好。
Trimer组合突变文库 VS NNK组合文库
NNK文库：
使用单一核苷合成的引物在突变位点处会不可避免的产生冗余突变和终止密码子，产生截断产物，氨基酸比例分布均一性差，后期筛选极大概率丢失高质量突变体。
Trimer文库
基于trimer引物在被突变序列的任意位置引入全部20个氨基酸的混合物，可避免密码子偏移、移码突变和控制终止密码子的掺入等问题，文库的均一性和覆盖性更高。
深度型服务方案先通过由半导体精准引物池构建的精准点饱和突变库（Precise Site-Saturation Mutagenesis Library，PML）穷举了所有突变的可能性，从而挑选出关键核心位点，再构建组合突变库进一步筛选可能的最优突变体，该过程利用金斯瑞蓬勃生物特色的FASEBA高通量筛选平台，提高了筛选的准确度和精准度。该深度型服务可以在14-16周内交付亲和力提升10倍及以上的优化抗体。
PML是一种饱和突变文库，每一个氨基酸都会被突变成其他19个氨基酸，且概率分布相同。通过对PML的筛选，我们会识别出3-5个突变热点。然后根据这些热点，我们将构建一个组合突变库，以找到组合突变库中3-5个具有亲和力的组合。这种方法可以提高筛选效率，增加获得高亲和力序列的概率。
通过 chip oligo构建PML,实现突变氨基酸的100%覆盖率
通过NGS对PML测序，验证各突变位点的突变分布情况
与传统NNK文库比较，PML具有明显优势
✔ 氨基酸随机突变，突变覆盖率低，突变文库的多样性低，后期需要大量的筛选工作，降低工作效率
PML
✔ 饱和突变文库，NGS测序确保18(不含半胱氨酸C)种突变氨基酸均匀分布，且仅含所需要的突变序列
✔ 后续筛选成功率高
✔ 可根据客户需求定制化设计突变文库
FASEBA（Fast Screening for Expression, Biophysical-properties and Affinity）是一个基于大肠杆菌的专利系统，在原核表达上清层面即可完成基于Biacore的ranking验证，大幅降低了重组表达的成本及周期，从而显著提升改造成功率。
FA Fast
S Screening of
E Expression
B Biophysical-properties and
A Affinity
FASEBA高通量筛选技术可以快速从大量候选蛋白中筛选出亲和力高、表达量高、生物物理性质好的分子
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